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    关于肝炎临床检验技术发展现状与展望

    作者:佚名来源:未知时间:2019/09/10

    严广友

    【摘要】丙型肝炎首次检测方法丙肝病毒-HCV检测法于1989年正式被提出,丙型肝炎病毒(HCV)医学检测研究和实践越来越深入。该研究为了解丙肝病毒检验技术发展与研究现状,对近年来的相关研究报道进行了综述,此类病毒的检验手段主要涵盖了HCV抗原检测技术、HCV-RNA核算扩增检测技术、抗-HCV检测以及HCV核心抗原和抗-HCV检测等类。了解不同HCV检验技术研究和应用现状、进展,是加快HCV检验技术研究改良以及更好地运用HCV检验技术、改善HCV临床诊疗水平与效益的关键所在。

    【关键词】抗原检测;核心抗原;核酸检测技术(NAT)

    丙型肝炎是丙型肝炎病毒(HCV)感染所致的典型全球性传染性疾病,HCV传播途径较多,并且有许多综合途径或隐性途径。由于目前临床上尚未研制出专门有效的丙型肝炎疫苗,因而需找灵敏的HCV检验途径、积极预防并及早发现HCV感染是避免丙型肝炎发病、影响人类健康的最佳方式。该研究为寻求有效可靠的HCV检验方式,对近年来研究较多的HCV抗原检测技术、HCV-RNA核算扩增检测技术、抗-HCV检测以及HCV核心抗原和抗-HCV检测手段应用现状及研究进展进行了综述。

    1抗-HCV检验技术

    抗-HCV检测技术是最早出现、研究和应用时间最久的HCV检测技术,此种方式是历经十几年不断尝试、改良得到的有效检测方式,并进一步演变出ELISA、双抗原加薪、充足免疫印迹法(RIBA)、蛋白芯片检测法、间接酶联免疫吸附试验f间接ELISA)、免疫层析法等多种实用可靠的方式。提及的这些各类检测手段中,重组免疫印迹法(RIBA)尤以极高的灵敏度得到一致认可,并且已经成为抗体检测的最佳标准:蛋白芯片的正确使用可灵敏得出准确的抗-HCV分型;ELISA则因其简单的操作、成本较低的设备材料和较满意的检测结果而成为目前应用最广、最实用的抗-HCV检测技术。

    2 HCV-RNA核酸扩增检测技术(NAT)

    有一项HCV复制活跃相对准确的指标,即为外周血中检出HCVRNA,HCV感染发生的14 d内即可检测发现HCVRNA,而感染恢复之前的血清改物质水平再次达到新高峰。当前,NAT检测技术已经成为部分临床工作者使用的HCV感染确认途径使用。HCV RNA水平会随饮食情况发生变化,当摄入食物蛋白、脂肪含量高时,其更易因结合脂蛋白、脂质而导致检出水平远远低于日常水平,这也是导致检查不准确的一种常见原因一。此外,NAT检测技术操作过程需要高标准的设备予以支持、经验丰富的操作人员予以配合,而且检查结果可能因为检查过程意外污染而呈现假阳性而影响检查结果准确度,因而此种检验方式在实际临床工作中或实验室研究中都难以真正大范围推广应用,普及难度较高。NAT检验技术的不同厂商研发出的方法和相关设备不尽相同,PCR测定方式相对适用于更多的条件及患者,使用效果最被认可,目前尤以套式PCR技术最佳,目前应用较多、效果最满意的当属荧光定量PCR技术,此种技术检测HCV感染时,有较高灵敏度,而且有自动定量检测手段更方便使用,近年来关于NAT技术应用的最新研究先后发现了基因芯片技术、环介导等温基因扩增技术(LAMP),前者操作简单、对仪器设备和材料要求不高,应用前景广阔。

    3 HCV抗原检测技术

    随着HCV抗原检测技术的不断更新和相关研究的不断深入,有学者提出抗原抗体复合物解离剂、单克隆抗体的加紧研究和应用是改良HCV抗原检测现有技术的关键所在。近些年,西方一些研究尝试推出定量、定性法相关的双抗体夹心法对血清标本中游离HCV或总HCV核心抗原ELISA试剂盒。上述新型检验技术相比RT-PCR技术进一步简化了操作、增强了环境适应性、缩短了检验所需时间,假阳性率也进一步得到控制,可以说,此种新的检验技术很大程度上克服了原有技术的短板,尤其适用于HCV血清学转换前期的抗-HCV阳性感染病毒血症分析、急性丙型肝炎诊断工作和HCV感染者就医过程中病毒血症跟踪观察等工作。另外,HCV核心区基因变异与HCV核心抗原检测结果有直接而复杂的联系,抗原检测敏感度并非一成不变。因而,对当前推广的试剂盒进行改良,就需要着重提升单克隆抗体的天然抗原构象表位亲和力。

    4同时检测抗-HCV与HCV核心抗原技术

    抗原抗体联合检验技术是临床专家经过反复实践分析,探索出的血清学、HCV筛查试剂盒联合检测新技术,当前相对成熟的成果是HCV核心抗原和外周蛋白抗体及部分核心抗体相结合的检测试剂盒。HCV核心抗原是HCV感染者体内出现的早期感染指标,几乎与HCVRNA同时出现,这体现了核心抗原和HCV RNA的动力学变化密切相关。

    HCV核心抗原侧测定分析主要依靠血清样品HCV核心抗原水平定量检测或双抗体夹心法定性检测。此种检验技术极少因样品内所含抗-HCV影响而出现精确度降低现象,结果相对可靠灵敏,此种技术可应用于HCV早期急性丙型肝炎的临床诊断。不久的将来,市场上将会出现越来越多的联合检测类试剂盒,通过两步检测实现筛查、诊断和辅助治疗工作,缩短检验所需时间是日后亟需解决的难题。

    5总结

    综上所述,HCV检验技术主要有HCV抗原检测技术、HCV-RNA核算扩增检测技术、抗-HCV检测以及HCV核心抗原和抗-HCV检测共4种类型,各有优劣,且都在不断改良和发展中。日后,临床上除了需要研究更多新的检验技术,还需要解决检验用时长、灵敏度低、结果易受影响等问题。

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