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    窄谱中波紫外线耐受白癜风皮损区SCF、IL—6表达的临床研究

    作者:佚名来源:未知时间:2019/09/10

    罗光浦

    【摘要】目的:探讨窄谱中波紫外线(NarrowBandUltraviolet,NB-UVB)对白癜风患者皮损内SCF及IL-6的影响。方法:选取30例白癜风患者,应用ELISA、RT-PCR等方法测定在窄谱中波紫外线治疗前A1组(未经照射组)及治疗后A2组(显效期皮损组)、A3组(平台期皮损组)SCF及IL-5含量及角质形成细胞SCF mRNA及IL-5 mRNA的表达量。同时测定正常皮肤对照组SCF及IL-6含量及角质形成细胞SCF mRNA及IL-6 mRNA的表达量。结果:A1组与正常皮肤对照组相比,IL-6及IL-6mRNA平均水平明显降低,SCF及SCFmRNA平均水平明显偏高。窄谱紫外线照射2 0次后,A 3组与正常皮肤对照组相比,IL-6及IL-6mRNA平均水平差异无统计学意义,SCF及SCFmRNA平均水平差异无统计学意义。窄谱紫外线照射2 0次及1 0次后,A 3组与A2组相比,IL-6及IL-6mRNA平均水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),SCF及SCFmRNA平均水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-6在经UVB照射1 0次及2 0次后逐步恢复至正常水平,可能是UVB治疗白癜风的机制之一。SCF在经UVB照射20次后其含量下降,可能是白癜风患者进入平台期的原因之一。

    【关键词】NB-UVB;白癜风;SCF;IL-6

    窄谱中波紫外线在皮肤科对多种疾病的治疗均有较为显著的效果,尤其在治疗白癜风时,受到皮肤科医生的青睐。既往研究证实,窄谱中波紫外线可刺激KC产生细胞因子如SCF、IL-6等,并以旁分泌作用的方式诱导Mc的黑素生成。

    1资料与方法

    1.1一般资料

    入选的30例患者均来自我科2014年3月至2016年1月就诊的白癜风患者。男17例,女13例(年龄15-45岁),平均(27.7±2.8)岁。病程6个月至11年。平均(4.12±3.16)年。选取10个健康人作为对照组。所有参加者均知情同意,治疗方案经本院伦理委员会讨论通过。

    1.2方法

    1.2.1皮损选择及干预措施

    每名患者的腹部皮损均选三处:分别标记为A1组(未经照射组)、A2组(显效期皮损组)、A3组(平台期皮损组)或选取一个皮损分为3处:分别标记为A1组(A1在行照射治疗前进行遮盖)、A2组、A3组。A1组皮损不进行照射,A2组皮损照射治疗10次,A3组皮损照射治疗20次。另选10个健康人作为正常皮肤对照组,男6名,女4名,年龄23-39岁,平均25.88±5.32岁。根据患者最小红斑量值,设立起始照射量,A2组、A3组皮损起始照射剂量、照射间隔时间、每次照射剂量增幅均相同。采用德国Waldmann(沃曼1公司的UV1001KLNB-UVB皮肤病治疗系统,所有患者单纯接受311nnmUVB,隔日照射。如再次照射时出现轻度红斑、瘙痒,照射剂量不变,直至症状消失。如有疼痛性红斑、水疱,待皮损消失后再进行皮损照射,照射剂量减少0.1J/cm2。

    1.2.2负压吸引发疱提取疱液

    A1组:采用BY--1I型皮肤分离仪负压吸引发疱,受皮区选择健康腹部皮肤,白斑区和供皮区先用75%乙醇消毒后同时发疱。负压设定为50 kPa,温度设定为50℃,完整、饱满的水疱形成后,用1mL灭菌注射器分别收集两处疱液(弃去血性疱液1,置-70℃冰箱;应用眼科剪,剪取疱壁,备用。正常皮肤对照组发疱方法同上。

    A2区:选择目前正处于复色良好的显效期皮损(连续4次之内明显复色者),采用以上1步完全相同的负压、温度等条件,获取疱液及疱壁,备用。

    A3区:选择平台期皮损(已连续8次以上复色无进展的),采用以上1步完全相同的负压、温度等条件,获取疱液及疱壁,备用。

    1.2.3实验方法

    应用双抗夹心ELISA方法,检测正常皮肤对照组及A1组、A2组、A3组SCF及IL-6含量。

    1.2.4引物设计

    应用RT-PCR技术分别检测正常皮肤对照组、A1组、A2组、A3组角质形成细胞SCF及IL-6 mRNA的表达量;用超纯RNA提取试剂盒提取组织样本中总RNA。实验操作按产品说明书进行。采用PCR仪进行扩增,引物序列如下:SCF引物:上游引物:5′-GATGTTTTGECAAGTCATTGTTGG-3′。下游引物:5′-AETGAETETGGAATETTTETEAGG-3′。IL-6引物:上游引物:5′-GAGACGCCTTGAAGTAACTG-3′。下游引物:5′-AACCAAAGATGTTCTGAACTGA-3′。

    1.2.5统计学方法

    应用SPSS 13.0软件对实验数据进行处理。采用配对样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

    2结果

    2.1 A1、A2、A3组与正常皮肤IL-6、SCF的表达比较结果

    见表1。

    2.2 A1、A2、A3组与正常皮肤,IL-6mlKNA及SCFmRNA比较结果

    见表2。

    3讨论

    有研究表明,多数学者认为除节段型白癜风外,白癜风的发生与自身免疫密切相关,而角质形成细胞(KC,keratinocyte)在其中起到了关键作用。KC通过释放细胞因子调节MC细胞的生长、分化、增殖、凋亡及黑素的产生及转运。既往研究表明,IL-6作为KC分泌的重要细胞因子,与白癜风的发生密切相关。我们的研究发现白癜风未照射区皮损内IL-6及IL-6mRNA与正常皮肤对照组相比明显降低,提示其降低可能与KC功能受损有关,与Tu等的研究相反。白癜风未照射区皮损内SCF及SCFmRNA与正常皮肤对照组相比明显升高,与Kitamura等研究一致。

    NB-UVB照射能促进KC分泌多种细胞因子,并诱导T细胞凋亡、抑制前炎症因子的释放,通过影响细胞因子的相互作用调节表皮黑素细胞的功能,促进黑色素生成。我们的研究发现,经NB-UVB照射10次、20次后,白癜风皮损内IL-6及IL-6mRNA持续升高,基本接近正常水平,可能为NB-UVB照射治疗白癜风的机制之一。这与Eberlein-KonigB等通过体外实验研究UVB对人类鳞癌细胞分泌IL-6的实验结果基本一致。但目前KC分泌IL-6的机制尚不清楚,有待进一步研究。

    窄谱紫外线照射20次及10次后,白癜风皮损内SCF及SCFmRNA平均水平下降,是否由于UVB照射治疗使部分KC凋亡,因而导致SCF及SCFmRNA表达平均水平降低尚有待于进一步研究。SCF与MC关系密切,在经UVB照射20次后其水平的下降可能影响MC增殖与迁移,这可能是白癜风皮损进入平台期的原因之一。

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