益肾胶囊原标准收载于苏药制Z04002040所附质量标准,由知母、萸肉、丹参、黄柏、生地、白花蛇舌草等14味中药制成。功能主治:解毒活血、滋阴清热。用途:用于肾炎、肾病综合症属阴虚内热型,拮抗激素引起的阴虚内热等症。萸肉实为山茱萸科植物,山茱萸(Cornus officinalisSieb.et Zuce)的成熟果肉(干燥),其有效成分为马钱苷。通过高效液相色谱法测定益肾胶囊中萸肉成分的含量,提高了该制剂质量标准,该方法较简便、快捷,稳定性及重现性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器
安捷伦 1260 高效液相色谱仪,G1314B VWD 检测器(美国Agilent公司);METTLEDO TOLEDO电子天平(梅特勒);紫分光光度计(日本岛津)。
1.2 试药
氧化二磷减压干燥12小时后使用;乙腈为色谱纯;水为纯化水;益肾胶囊(镇江市丹徒区中医院;批号:140218,130122,130516)
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱:安捷伦 C18柱(150 mm4.6 mm,5 m),流动相:乙 腈 水 (14:86),检 测 波 长 238nm,柱 温:30℃ ,流 速 :1.0mL/min,进样量:10l,理论塔板数 4168。
2.2 溶液的制备
称取马钱苷对照品 10.42mg,置 100ml 容量瓶中,加80%甲醇振摇使其溶解,加 80%甲醇稀释至刻度,摇匀,制成对照品贮备溶液(每1ml溶液中含马钱苷103.37g)。再精密量取储备溶液2ml,置10ml容量瓶中,加80%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。取本品10粒内容物,精密称定,4.2752g,混均,研细,称取供试品1.0232g,置20ml容量瓶中,加80%甲醇约15ml,超声处理(功率250W,频率40KHZ)30分钟,放冷,用 80%甲醇溶液至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3 标准曲线
精密量取马钱苷对照品贮备液0.5 ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml 分别置于 10ml 容量瓶中,加 80%甲醇稀释定容至刻度,摇匀,在上述色谱条件下进样分析,以浓度(x)为横坐标,相应峰面积(y)为纵坐标进行线性回归,绘制标准曲线,得回归方程为 y=10.336x-0.00342(R=0.9999),线性范围5.17~51.68g/ml,结果表明线性关系良好。
2.4 重复性
精密称取批号为140218样品6份,按照样品含量测定项下方法测定,测得结果,计算出马钱苷的量,其平均含量为0.12mg/粒,RSD为0.5%。
2.5 精密度测定
取马钱苷对照品溶液,进样6次,每次10l,记录峰面积,其相对平均偏差(RSD)为0.8%。
2.6 稳定性
取供试品溶液适量,室温放置12小时,在本试验条件下,每隔2小时间隔,进样10l,记录峰面积,计算结果,RSD为0.9%。结果表明该方法稳定性好,供试品溶液12小时内较稳定。
2.7 回收率
取6份已知含量的益肾胶囊样品(批号为140218),精密称取本品内容物0.5g,分别置于20ml的容量瓶中,依次精密加入马钱苷对照品贮备液 1ml,1ml,1.5ml,1.5ml,1.8ml,1.8ml,照样品溶液的制备,并进行测定马钱苷的量,平均回收率为99.88%, RSD为0.4%。
2.8 阴性试验
按照处方配比称取除萸肉以外的其它成分,按照制备工艺制成阴性溶液,并照样品测定法测定,在主组分出峰处无干扰。
2.9 样品测定
取对照品溶液和样品溶液,各进样10l,按照上述测定法测定,读取峰面积值,计算结果。
3 讨论
3.1 在供试品溶液制备方法中,我们对比了超声提取、回流提取、索氏提取等方法,结果表明超声提取完全;对提取时间的考察,分别考察了20分钟、30分钟、40分钟、60分钟,超声提取时间比较表明30分钟、40分钟和60分钟的提取效率一样,而20分钟提取不完全,因此本试验确定超声提取时间为30分钟。
3.2 本方法简便、快捷、分离度好,测定结果科学、公正、准确、可靠,可作为该制剂质量控制指标之一。
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